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1、实验一 细胞的形态结构与显微测量【实验目的】 1.掌握人体及动物等真核细胞的基本形态结构。 2.掌握临时玻片标本的制备方法。3.进一步掌握光学显微镜的使用方法。4.掌握显微测量的基本方法。【实验原理】细胞是生物体的结构和功能的基本单位。构成人体或其他高等生物体的细胞种类繁多、形态各异，而且这些细胞的形态与其功能往往相适应，如具有收缩功能的肌细胞呈条形或长梭形；运输o2和co2的红细胞(rbc)为双凹圆盘状，便于在血管中流动；具有感受刺激、传导冲动功能的神经细胞一般附有长短不一的树枝状突起；精子细胞具有一根长长的鞭毛，故很善于运动；巨噬细胞（macrophage）呈不规则形状，能伸出伪足，吞噬和
2、消灭外源的病原微生物。细胞的体积差别很大，一般来讲，真核细胞的体积要大于原核细胞，高等动物的卵细胞大于体细胞（卵细胞含有较多的营养物质卵黄）。对于大多数人体及动物的细胞来说，其体积一般在2030m之间，必须借助于光学显微镜才能被观察到。由于细胞体积微小，而且含有较大比例的水，故大多是无色透明的，如果不经染色处理，在显微镜下难以看清细胞的结构。因此，要观察某种细胞时，通常先进行染色处理。在普通光镜下，一般可见人体及动物细胞的基本结构分为细胞膜、细胞质和细胞核等3个部分。细胞中分布有多种具有一定结构与功能的细胞器，它们有的体积较大，如线粒体和高尔基复合体，可通过不同的染色方法将其在光镜下分别显示出
3、来，这些在光镜下常可见的结构通常称为细胞的显微结构。【器材与试剂】1.器具：显微镜、载玻片、盖玻片、蜡盘、牙签、纱布、药棉、吸水纸、擦镜纸、剪刀、小尖摄、解剖针、玻璃缸、显微测微尺。 2.材料：小白鼠、青蛙、蟾蜍、人口腔上皮细胞、洋葱、鸡血液、人血液、小鼠精子、兔或猪脊髓、蛙肾小管切片、猫卵巢切片、猫小肠切片、兔或大鼠肝脏切片。3.试剂：1碘液、1甲苯胺蓝、瑞特染液，ringer液，显微镜油，乙醚酒精，二甲苯。4.试剂的配制：1碘液：称取1g碘片和2g碘化钾溶于100ml的80乙醇或蒸馏水中即可。1甲苯胺蓝：称取1g甲苯胺蓝染料加蒸馏水100ml溶解即可。瑞特染液：称取0.1g瑞特染料（wri
4、ghtsstain）粉放入研钵中研细，从60ml甲醇中取少许加入研钵中反复研磨，最后加入全部甲醇混匀，装入棕色瓶中保存备用。【内容与方法】一、细胞标本的制备及细胞基本形态结构的观察所有需观察的细胞都应放置到无色透明的载玻片上制备成临时或永久玻片标本后才适于在光镜下观察，在很多情况下，在细胞或组织上还需加盖一张薄而小的玻片盖玻片，以起到保护标本的作用。制备玻片标本所用载玻片和盖坡片要进行清洁，其步骤如下：载玻片先用洗衣粉水刷洗，清水冲洗后，经洗液浸泡24小时以上，再用流水充分冲洗，最后烤干备用。对于临时制片所用的载玻片和盖玻片若要求不高也可用揩擦的办法来清洁，即取一张载玻片，用左手拇指和食指夹持
5、载玻片的两端，右手的拇指和食指夹着一块清洁而柔软的布或卫生纸巾，把载玻片放在两手指夹着的布间，然后均匀地前后移动擦净载玻片的两面。盖玻片小而薄，擦时必须小心，把一张盖片放在左手两手指夹着的布间，并轻轻捏住，右手指夹持盖片的边缘向一个方向转动进行擦拭，用力需轻而均匀。（一）人口腔粘膜上皮细胞标本的制备与观察1.粘膜细胞涂片标本的制备：方法1:吸取一滴碘液滴在一张洁净的载玻片中央，用一根灭菌的牙签伸入自己的口腔内壁刮取粘膜上皮细胞，然后将它涂在载玻片上的染液中并来回搅动使细胞散开；方法2:刮取粘膜上皮细胞，按一定方向涂在洁净上的载玻电上，加一滴甲苯胺蓝溶液染色1分钟左右后小心加盖盖玻片（尽量避免产
6、生气泡）用滤纸吸去盖玻片周围的液体。2.观察：将自制的口腔上皮细胞标本片置于显微镜下观察，先用低倍镜寻找较分散的、轮廓清晰的上皮细胞，由于该细胞体积较小、着色较淡，观察寻找时应稍降低视野中的亮度以便于较快找到目标。用甲苯胺蓝染色的上皮细胞呈淡蓝色，用碘液染色的呈黄色。成群或分散分布，形态大多呈扁平椭圆状（图2-1）。选择轮廓清晰的细胞移至视野中央，转高倍镜观察。高倍镜下可见人的口腔粘膜细胞外有一层薄薄的细胞膜，扁圆形的细胞核呈深黄色(碘染色)或深蓝色（甲苯胺蓝染色），位于细胞中央，细胞质染成浅黄色或浅蓝色。在核中有时可见一致密的结构，即为核仁。 图2-1 人口腔上皮细胞（二） 血细胞涂片标本的
7、制备与观察1.制片用小吸管吸取已抗凝和稀释的人血、小鼠血或蟾蜍血滴一小滴至载玻片的右端，另取一张边缘光滑的载玻片，让其一边接触血滴，使之与玻片之间成3045角，迅速向前推移，使玻片上留下薄而均匀的血膜（图2-2）。通常推片与玻片间的角度愈大，血膜愈厚；斜角愈小，速度愈快，则涂片愈薄。血滴的大小对血膜厚薄也有影响，血滴越大，则血膜越厚。推片时速度要一致，否则血膜呈波浪形，厚薄不匀。将血涂片放置在空气中自然晾干，也可手持涂片在空气中晃动以加速其干燥。染色：在玻片上血膜薄而均匀的区域滴上几滴瑞氏染液或先用玻璃蜡笔在血膜较薄区画一圆圈，再往圈中滴加染液，这样可防染液向四周扩散）。染色1分钟后往染液中加
8、入等量的蒸馏水稀释染液，继续染23分钟。此时，液面上可浮现一层金黄色的金属样物质。用自来水轻轻冲去玻片上的染液，晾干后即可。以同样的方法再制备一张鸡血涂片。 图2-2 血涂片的制备方法2.观察：将已染好色的人血涂片标本（肉眼要可见血膜呈粉红色）放置到显微镜下，先用低倍镜检查整个血涂片，选择细胞均匀分布、较少重叠、有核细胞较多的区域，然后转换高倍镜仔细观察红细胞和白细胞（wbc）。在人或小鼠的血涂片上红细胞数目最多、体积小、呈圆饼状，无细胞核（图2-3），胞质呈粉红色；白细胞在血细胞中所占比例较小，寻找较困难些，但胞体较大，细胞核明显，形态多样，呈蓝紫色。鸡或蟾蜍的血细胞的形态与人或小鼠等哺乳类
9、有很大不同，在蟾蜍血涂片中，可见红细胞呈卵圆形，并具椭圆形的细胞核（图2-4）。 图2-3 人血红细胞形态 图2-4蟾蜍血红细胞形态（三） 动物脊髓神经细胞标本的制备与观察切取青蛙或蟾蛙脊髓一小段放到载玻片上，剪碎或捣碎，再取另一载玻片有力挤压脊髓使其成薄薄的一层，拿掉玻片后即得到神经组织的压片标本。然后滴加12滴甲苯胺蓝染液染色10分钟左右，最后盖上盖玻片，吸去多余的溶液后即可进行观察。在显微镜下可见到许多被染成深蓝色的小细胞，它们是神经胶质细胞，而那些体积较大且具有多个星状突起的细胞即为脊髓前角运动神经细胞（2-5）。图2-5 神经细胞的形态（四） 小鼠或青蛙肝细胞压片标本制备与观察取小一
10、块（23mm3）小鼠或青蛙的肝组织浸入ringer液清洗并挤去所含血液，捞出后放置到载玻片上剪碎，盖上盖玻片或载玻片并用力挤压，取下盖玻片，滴加1的甲苯胺蓝染液染色10分钟左右，最后盖上盖玻片并用滤纸吸去多余染液，一张肝细胞压片标本就制备好了。将标本放到显微镜下，分别用低倍镜和高倍镜仔细观察肝组织压片，可见肝细胞呈紧密排列，被挤成了多角形，细胞核被染成深蓝色。（五） 青蛙或蟾蜍骨骼肌细胞标本的制备与观察 将一只青蛙或蟾蜍处死后，去除其腿部皮肤，剪下腿部肌肉一小块放至载玻片上，用尖镊或解剖针将肌肉剥离为肌束，再进一步将肌束剥成细长的肌纤维（直径小于头发丝），尽可能拉直肌纤维并用碘液染色1分钟左右
11、，盖上盖玻片即可观察。在镜下可见，骨骼肌细胞为纤维状，有明暗相间的横纹，每个横纹肌细胞（肌纤维）具有多个细胞核，呈卵圆形，紧贴肌膜分布。(六） 小鼠精子细胞的观察取一只小鼠的睾丸放入小烧杯或小瓶中彻底剪碎，加入37的生理盐水，用吸管吹打，使精子从精细管中游离出来，制成精子悬液。用吸管吸取悬液，滴一滴至载玻片上，盖上盖玻片，放到光镜下。由于精子很细小，且未经染色故观察时应将视野的亮度减小，视野中可见每个精子细胞都具有细长的尾丝，可进行多种方式的运动。(七) 显微测量（micrometry）1.显微测微尺及其使用方法显微测微尺（micrometer）简称测微尺，可用来在显微镜下测定标本大小。测微尺
12、是由目镜测微尺（目尺）和镜台测微尺（台尺）所组成。目尺是块圆形玻璃片，玻片中央有一小的刻度尺，长510mm，分成50-100格（见图2-10）。每格的实际长度因不同的物镜的放大倍数和不同镜筒长度而有所不同。因此，用前必须用台尺进行标定后，才能代表真实长度。台尺是由一块载玻片制成，在某中央有圆形的测微尺，它的长度为1或2mm，分成100或200格，每格实际长度是0.01mm（10m），（见图2-11）。01234567801234 图2-10 显微测微尺目尺 图2-11 显微测微尺的台尺当用目尺测量细胞大小时，因为它的刻度没有具体长度，所以必须先用台尺核实每一格的长度，具体方法如下：从显微镜上取
13、下目镜，卸下目镜的上透镜，将目尺有刻度的一面向下轻轻地放在光圈板上，再旋上目镜的上透镜。 将台尺的刻度面向上，放在镜台上夹好，调节焦距，使台尺上的刻度清晰可见。细心移动台尺和转动目尺，使两尺左边的一直线重合。然后由左向右找出两尺的另一重合的直线（2-12）。 图2-12 目尺测微尺（上）与台尺测微尺（下）记下两重合线间目尺和台尺的格数，按下式计算出目尺每格等于多少m: 台尺的格数 目尺每格的长（m）=10m 目尺的格数例如上图中台尺68格等于目尺的50格，将此代入上式可得出： 68 目尺每格长度10m=13.6m 50 分别在低倍镜和高倍镜下测定目尺每格等于多少m。取下台尺，换上你需要测量的标
14、本，此时，用目尺就可直接测量欲测标本的大小（也就是测出目尺的格数），然后再将所得的格数乘以已测出的每格代表的长度，即可算出标本的实际大小。2.测量血细胞的大小按上述的测量步骤进行测量，每种细胞（红细胞、粒细胞和淋巴细胞）测量5个，求其平均值作为该细胞的大小，测量时，应选用几种放大倍数进行测量，以便比较。【作业与思考】1. 绘图表示口腔上皮细胞的基本结构。2. 细胞生物学绘图有哪些基本要求？3. 如何制备血涂片标本？4. 分别求出使用低倍镜、高倍镜时目镜测微尺每格代表的长度。5. 绘所观察的种血细胞的基本结构。6. 分别测量每种血细胞的直径个，求其平均值（x），将测得的结果按下表方式记录在实验报
15、告单上。 人血细胞大小（直径）测量结果 平均数（x） 格数 直径 格数 直径 格数 直径 格数 直径 格数 直径 格数 直径红细胞 单核细胞 粒细胞 淋巴细胞实验二 dna和rna的显示【实验目的】1.了解dna、rna生物大分子在细胞内的存在部位。2.学习普通细胞化学检测方法。【实验原理】dna和rna分别存在于细胞的细胞核和细胞质中，细胞质中也有dna如线粒体dna细胞核中也有rna但量不多，细胞经甲基绿-派罗宁混合染液染色后，细胞内的dna和rna会呈现出不同的颜色反应，这是由于两种核酸与其聚合程度不同所致。在两种染液混染时，两者发生竞争，dna（为高聚分子）能被甲基绿染成绿色；rna（
16、为低聚分子）则被派罗宁染成红色。这样就能使细胞中两种核酸分别显示出来。【实验方法】方法：制备蟾蜍血涂片 固定晾干 染色水冲洗 吸取多余水 分色 晾干 镜检【注意事项】1.制备血涂片要薄而均匀2.分色时要注意时间，多次数秒【作业】 1. 绘图标明蟾蜍红细胞内dna和rna显示的部位。实验三 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的显示【实验目的】1. 了解细胞内生物大分子在细胞内存在的部位。2. 学习普通细胞化学检测方法。【实验原理】1. 不同蛋白分子所带有碱性基团和酸性基团的数量不同，因此，在不同的ph值溶液中整个蛋白所带的电荷多少也不同。2. 在一定生理条件下，整个蛋白质带负电荷多，则为酸性蛋白；若带正电
17、荷多，则为碱性蛋白。3. 三氯醋酸处理抽提核酸后，剩下蛋白用ph值不同的固绿染液分别染色后，细胞内不同性质的蛋白就可以通过着色不同而显示出来。【所需主要试剂和器材】主要试剂：1.90。c 5%三氯醋酸2.染液 a 0.2%固绿染液+100ml h2o;b 1/75 mol/l hcl 12 mol/l hcl0.11 ml+98.89 ml h2oc 0.05%na2co3 50mg na2co3+100ml h2o3实际用液 a:b=1:1混合后ph=2.0-2.5 a:c=1:1混合后ph=8.0-8.5 4. 70% 乙醇 主要器材：1.染液缸2.显微镜3.常用的解剖器械4.注射器 5.
18、水浴锅【方法与步骤】1. 固绿染液的配制2. 取材与涂片 心脏采血，涂两张片子并晾干 3.固定 70% 乙醇固定5分钟，室温晾干4. 三氯醋酸处理 60摄氏度，30分钟或者90摄氏度，15分钟，时间结束后，用清水反复冲洗三氯醋酸，更好的分离酸性和碱性蛋白。5.染色 两种染液各放一张做好的片子，酸性染液中5-10分钟，碱性染液中10-15分钟，时间结束后用清水冲洗，晾干后镜检。6.结果分析 酸性固绿染液的制作的标本 细胞质和核仁中为绿色，表明酸性蛋白的分布位置。 碱性固绿染液的制作的标本 核内为绿色，表明碱性蛋白的分布位置。【注意事项】 1.涂片是，要注意速度和角度，血膜的厚度尽可能的薄。2.清
19、水冲洗三氯醋酸要彻底。【作业】1. 绘制酸性和碱性蛋白在细胞中的分布图。实验四 细胞内酸性磷酸酶的显示【实验目的】1.了解细胞内生物大分子在细胞内存在的部位。2. 学习酶化学检测方法。【实验原理】 细胞内酸性磷酸酶+作用底物（外加的，含有磷酸酯，在ph=5.0）po43-+pb2+(外加底物中含有的) pb 3（po4）2无色+s2- pbs棕黑色。 通过一定的条件，保持酶的活性，最后通过有色沉淀pbs反馈出酸性磷酸酶的存在部位。【所需主要试剂和器材】 主要试剂： 1.作用液（现配现用）： 蒸馏水h2o 90ml 0.2mol/l 醋酸缓冲液（ph=4.6） 12ml 5% pb(no3)2
20、2ml 3.2% -甘油磷酸钠 4mlh2o+醋酸缓冲液混合液均匀混合，一份加pb(no3)2， ，一份加甘油磷酸钠，缓缓混匀用醋酸调节ph=5.0 2.生理盐水 3.10% 的甲醛 4. 2%(nh4)2s主要器材：1.染液缸2.显微镜3.常用的解剖器械4.注射器 5.水浴锅【方法与步骤】 1. 酸性磷酸酶作用液的配制2. 抽取免疫小鼠的腹腔液 用含有6%的淀粉肉汤1ml 连续免疫3天，抽取腹腔液前注射1 ml生理盐水。3.制备涂片 室温晾干的片子作实验组，可以用80摄氏度下晾干的片子作对照组。4.37摄氏度作用液温浴30分钟 结束后，蒸馏水漂洗，然后晾干5.10%甲醛固定5分钟 蒸馏水漂洗
21、，然后晾干6. 2%(nh4)2s处理3-5分钟蒸馏水漂洗，然后晾干7.镜检 结果分析，细胞质中棕黑色沉淀为pbs，沉淀区域表明酸性磷酸酶的富含区域。【注意事项】 1.温度 37摄氏度，保持酶的活性 2.片子注意晾干【作业】 1. 图示巨噬细胞中酸性磷酸酶的分布区域。实验五 线粒体和高尔基复合体的光镜观察 【实验目的】 1.熟悉线粒体、高尔基复合体在光镜下的形态。 2.进一步掌握光学显微镜的使用方法。【实验原理】 在真核细胞中存在着多种具有特殊形态结构和功能的细胞器，如线粒体、高尔基复合体、内质网、溶酶体、中心体、微管、微丝和核糖体（又称核蛋白体）等。这些细胞器中有的经过特殊的染色后在光镜下就
22、可被观察到，而有些细胞器由于体积非常细小只有在电镜下才可见到。在光镜下可见线粒体常呈颗粒状、棒状或弯曲的线状。线粒体的形态和数量随不同生物、不同组织及不同生理状态而发生变化，例如肝细胞、胰细胞的线粒体通常呈线状；成熟的卵细胞内线粒体呈颗粒状； 肾细胞内的线粒体常呈棒状。线粒体含有细胞色素氧化酶系统，当用活细胞染料詹纳斯绿b(janus green b)对线粒体进行专一性活染时，线粒体的内膜和嵴膜的细胞色素氧化酶可使该染料始终处于氧化状态而呈蓝色，而在线粒体周围的细胞质中的詹纳斯绿b则被还原，呈无色。 动物的组织切片经特殊的染料处理后，其细胞中也可显示出线粒体的形态。线粒体的组成成分主要脂类和蛋
23、白质，脂类又以磷脂为主。由于线粒体中蛋白质、磷脂含量很高，故有大量的羧基和磷酸基等阴离子基团，使带阳离子的铁苏木精很容易与其结合而着色，从而将线粒体显示出来。神经组织切片中的高尔基复合体标本是以硝酸钴固定后再经硝酸银染料浸染制成的永久标本，由于组成高尔基复合体物质具有还原银盐的能力并可使其呈现棕褐色沉淀，因而能显示出高尔基复合体的形态和位置。【内容与方法】一、线粒体的观察1.蛙肾细胞线粒体的观察：将蛙肾切片标本置于低倍镜下观察，可见有许多被染成深蓝色的圆形和椭圆形的环状结构，这就是肾小管的横切面。每一肾小管的管壁由单层紧密排列的上皮细胞围成，其中间的腔为肾小管管腔。转换高倍镜和油镜仔细观察，可
24、见细胞中央有一圆形的细胞核，其中有一被染成蓝色的核仁。细胞之间的细胞膜界限一般难以分辩。在细胞质中有许多蓝黑色的短杆状和颗粒的结构，即为线粒体。一般在细胞的基部分布较多，而靠近管腔的胞质中较少（5-1） 图5-1 蛙肾小管细胞中的线粒体 2.兔肝细胞线粒体的观察：在显微镜下可见，免肝脏切片（铁苏木精染色）中肝细胞体积较大，呈多边型；细胞核大而圆位于细胞中央，染色较淡。细胞质呈天蓝色，其中分布有许多染成蓝黑色的线粒体。选择一结构较清晰、染色较淡的区域换油镜观察，可见肝细胞中线粒体的数目不一，分布或疏或密，在细胞核周围很多，线粒体的形态呈颗粒状、线条状等。如果细胞很密集，难以分清边缘，可以先找到细
25、胞核，由细胞核往外找细胞的边缘，找到边缘清晰的细胞后，移至视野中央，再转换高倍镜和油镜观察。3.人口腔粘膜上皮细胞活体染色显示线粒体将洁净载玻片平放在工作台上，滴2滴1/5000詹纳斯绿b染液于载玻片中央。 用消毒牙签刮取口腔颊粘膜细胞，用力应稍重些，以便得到生活力较旺盛的细胞，然后将刮取物小心地混合于载玻片上的染液中，盖上盖玻片。310分钟后用显微镜观察，在高倍镜下可见颊粘膜细胞质中散布有一些被染成亮绿色的短杆状或圆形颗粒，即为线粒体。4.洋葱细胞活体染色显示线粒体用镊子撕下洋葱鳞茎表皮一块放入盛有詹纳斯绿b染液的小培养皿中染色1015分钟左右。将染好色的表皮组织取出放到载玻片上，滴上一小滴
26、ringer液，盖上盖玻片。将制备好的洋葱表皮组织装片标本放到光镜下，先用低倍镜找到形态和着色良好的表皮细胞，然后转换高倍镜观察。在镜下可见线条状或颗粒状的线粒体被染成蓝绿色。二、高尔基复合体的观察神经细胞因蛋白质合成旺盛而具有发达的内质网和高尔基复合体。将兔脊神经节切片标本（或豚鼠脊神经节切片）先放置到低倍镜下观察，可见到神经节内有许多淡黄色圆形或椭圆形的神经节细胞（感觉神经细胞），它们被神经束分割成群。将轮廓清晰而完整的细胞移至视野中央，换高倍镜仔细观察，可见细胞中央有一圆形或椭圆形的不着色区域即为细胞核。高尔基复合体被染成棕褐色，呈线状、点状或卷曲成网状，分布于核周围的细胞质中（图5-2
27、）。不同神经细胞中高尔基复合体的数量、分布、形态和大小都不尽相同。 图5-2 神经细胞的高尔基复合体【作业与思考】1.简述高尔基复合体和线粒体标本制备的原理。2.绘图表示高尔基复合体和线粒体在光学显微镜下的形态结构。实验六 细胞生理活动的观察【实验目的】 掌握细胞吞噬作用的原理，详细观察细胞吞噬过程。 【实验用品】 1.实验材料 小白鼠、6淀粉肉汤、1鸡血悬液。 2.器材和仪器 显微镜、载玻片、注射器（2ml）、剪刀、镊子、吸水纸、1ml及5ml移液管、试管、吸管、记号笔、蜡盘。3.试剂 0.9生理盐水【实验内容】 吞噬作用广泛存在于不同的组织和细胞。原生动物如草履虫、变形虫等，是以吞噬方式取
28、食。较高等动物的细胞对大分子物质或外来有害异物（如病菌）进行吞噬作用，然后再行“细胞内消化”，对机体有防御功能。 白细胞是机体内防御系统中能游走的单位，它分为粒细胞系、单核细胞系和淋巴系三类。它们有许多生理功能，如游走性、变形运动、趋化性和吞噬异物等。在白细胞中，以粒细胞、单核细胞的吞噬活动较强，故称此二类细胞为吞噬细胞。吞噬细胞可吞噬外来病原菌、杀死外来毒素、识别抗原、传递信息给淋巴细胞、杀死肿瘤细胞，与炎症、变态有关。单核细胞由血液进入组织后，逐渐演变成巨噬细胞。吞噬细胞首先由于趋化作用向异物游走，然后伸出伪足包围异物，并发生内吞作用形成吞噬泡将异物吞入细胞，继而溶酶体与吞噬泡融合消化异物
29、。本实验观察小白鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活动。 1.预备实验 在实验前两天，每天给小白鼠腹腔注射6淀粉肉汤0.51ml(含0.3台盼兰，起标记作用)，以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞(macrophage)。 2.实验时，每组取上述处理的小白鼠一只，腹腔注射1鸡红细胞悬液（crbc）1ml，注射后轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。 3.3040min后，腹腔注射0.51ml生理盐水，停留23min后， 用颈椎脱臼法处死小鼠，轻揉腹部，剖开小鼠腹部，用注射器取腹腔液于载玻片上，盖上盖玻片，进行观察。 4.观察 在高倍镜下可见许多体积较大的圆形或形状不规则的细胞，即是巨噬细胞，其胞质中含有数量不等的淡蓝
30、色小颗粒（是吞入含台盼兰的淀粉颗粒）；镜下还见到一些黄色椭圆形有核的鸡红细胞。移动玻片标本，观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况，有的鸡红细胞紧附在巨噬细胞表面；有的已部分被巨噬细胞吞入；有的巨噬细胞已吞入一个或多个鸡红细胞，形成吞噬泡。溶酶体与吞噬泡融合消化异物。 镜检时，光线应稍暗一些，高倍镜下绘图记录所见结果。【作业与思考】 1.作业 在高倍镜下绘几个巨噬细胞吞噬鸡红细胞的图（处在不同吞噬阶段），示吞噬作用的过程。 2.思考题 细胞吞噬活动对动物和人体有何意义？ 如小鼠腹腔内注入鸡红细胞后时间过长时，可能会出现什么情况？实验七 有丝分裂标本的制备和观察一、实验目的 1.通过动植物细胞有丝分裂标
31、本的观察，掌握有丝分裂各期的主要特征。2.认识动植物细胞有丝分裂过程的主要区别点。3.了解植物细胞有丝分裂临时压片方法。二、实验原理有丝分裂是真核细胞的细胞分裂方式，其特点是通过纺锤体将遗传物质精确地等分到两个子细胞中，以保证细胞在增殖过程中保持遗传稳定。三、实验用品1.材料标本 洋葱根尖固定（或新鲜）标本，洋葱根尖纵切片、马蛔虫子宫横切片。2.器材 显微镜、盖玻片、载玻片、小烧杯、剪刀、镊子、吸水纸、恒温水浴箱、吸管、带橡皮头铅笔、解剖针、眼科镊、培养皿、滴瓶、擦镜纸、离心机、肾形蜡盘。3.试剂 甲醇、冰醋酸、70酒精、1mol/l hcl、改良苯酚品红染液、蒸馏水和50、60醋酸、改良苯酚
32、品红染液、无水乙醇、90乙醇、85乙醇。四、内容和方法（一）植物细胞有丝分裂标本制备及观察 1.药品配制：改良苯酚品红染液：该染色液是先配成a液，然且再配成b液、c液及工作液，配方如下：a液：碱性品红3g，70乙醇10ml。b液：a液10ml加5苯酚水溶液90ml。c液：b液55ml加冰醋酸6ml，37福尔马林6ml。工作液：c液10ml加45冰醋酸90ml，山梨醇1.8g混合溶解。 2.取材 取洋葱鳞茎，剪去老根，置于盛满清水的小烧杯上，使部分鳞茎浸入水中，室温（25）或放25左右的恒温培养箱中培养。约34天后，鳞茎部长出不定根，待长12cm时，剪下根尖约0.5cm，置于甲醇（或冰醋酸）固定
33、液中固定，3小时后转入70酒精中冰箱保存备用。 3.压片 将根尖取出，水洗后放入盛有少量1mol/l hcl的小烧杯中，并置于60恒温水浴箱内软化约10分钟，待根尖发白变软时取出置于载玻片上，滴一滴水洗去hci，用吸水纸吸干，滴12滴改良苯酚品红染液，将组织分散，见染成红色时，盖上盖玻片，在盖玻片上放两层吸水纸，用铅笔橡皮对准标本轻轻敲击，（不要挪动标本），见根尖压扁铺开后置于显微镜下观察。4.洋葱根尖细胞有丝分裂的观察取洋葱根尖压片和洋葱根尖切片标本，在低倍镜下找到根尖较前端的生长点部位，此处细胞排列紧密，略呈方形，染色较深，该处可见到许多处于不同分裂期的细胞。转换高锐镜观察，可见间期及有丝
34、分裂的细胞。间期（interphase） 细胞在体积上明显增大，细胞核圆球形，核膜、核仁比较清楚，核染色质分布均匀，核中可见1-3个染色较浅呈球形的核仁。前期（prophase） 细胞核膨大，核内染色质先呈颗粒状，然后再浓缩成丝状结构称染色丝，其后染色丝进一步缩短变粗，形成染色体，核膜、核仁最后消失。中期（metaphase） 染色体聚集到细胞中央的赤道面上，（即纺锤体中央，在压片标本上纺锤体不易见），侧面观呈一直线称赤道板。染色体变短粗，而且彼此松开，染色体只有着丝粒位于赤道面上，而染色体其它部位可以处于任何位置，因此，侧面观察染色体呈一直线，极面观呈菊花状。此期染色体形态最典型，每条染色体
35、含有两条染色单体，由一个着丝粒相连。洋葱的染色体数为16条。所以中期染色体很适于做染色体的形态结构的研究，以及做染色体核型和带型的分析。后期（anapase）排列在赤道板上的每条染色体的着丝粒纵裂为二，两条染色体单体分开由纺锤丝牵引，分别向两极移动，如此形成相对应的两组染色单体，每一染色单体即为一条新的染色体。末期（telophase）染色体移到两极并解旋为染色质。同时核膜和核仁出现，形成两个新核，纺锺体逐渐消失。注意观察两个新核之间出现的细胞板，这样完成细胞分裂，一个细胞变为两个细胞。（二）动物细胞有丝分裂的观察低倍镜观察马蛔子宫横切片，可见子宫内有很多已受精的卵，马蛔虫受精卵最外围有一层很
36、厚的结构，称受精膜。膜内有宽大的围卵腔。受精卵即悬浮于围卵腔中，对照图6-2以高倍镜观察寻找受精卵进行有丝分裂的前、中、后、末四个时期。注意观察中心粒和雌雄原核。1.未分裂的受精卵 其中含两个核，一个雌原核和一个雄原核，核内含细丝状染色质，在受精膜内侧，有一深染小体，其为第一极体，在受精卵边缘，也有一小体，为第二极体。2.前期 核膨大，中心粒位于细胞的一端，可见星丝，染色质由线状缩短变粗形成染色体。至前期末，核膜、核仁消失，中心粒分裂为二，并移向两极。3.中期 纺锤体形成，染色体排列于赤道板上。马蛔虫的染色体数为6条，在中期清晰可数，此时可见两极有中心体，星丝明显可见。4.后期 细胞核拉长，由
37、于纺锤丝的牵引，染色体纵裂后向两极移动，形成两组染色体，两组染色体间可见纺锤丝。5.末期 趋向两极的染色体逐渐解旋为染色质，核模、核仁重新出现。细胞中部细胞模向内凹陷，最后以横缢的方式裂成两个子细胞，末期纺锤体消失。比较洋葱根尖细胞和马蛔虫受精卵细胞的有丝分裂过程，可知植物细胞和动物细胞的有丝分裂过程在两个方面有所不同。动物细胞有丝分裂有中心体，在前期时它的两个中心粒互相分离，并向细胞两极移动，每个中心粒周围出现星芒状的丝样结构，称星射线。在中期时，两个中心粒移到细胞的两极，中间以纺锤丝相连；植物细胞在末期形成细胞板，将两个细胞分隔，而动物细胞末期在细胞的赤道板部位，细胞模向内凹陷，最后以横缢
38、的方式裂成两个子细胞。五、注意事项1. 洋葱根尖标本要先用甲醇或冰醋酸固定，再用酒精固定，不能直接用酒精固定。2. 标本解离要充分。3. 吸水纸吸水要彻底，否则染色效果不好。4. 制片时要把细胞分散开，否则观测效果不好。5. 不要使玻片滑动，也不能敲碎玻片。六、作业与思考1. 绘出马蛔虫受精卵有丝分裂的细胞图并注明结构名称。 2. 简述洋葱根尖压片的操作过程。 3. 叙述植物细胞有丝分裂过程，说明各期特征。 4.动、植物细胞有丝分裂有何异同？实验八 减数分裂标本的制备与观察一、实验目的1. 熟悉动物细胞减数分裂标本的制备方法。2. 观察减数分裂标本片，熟悉蝗虫精母细胞减数分裂的基本过程及各期的
39、形态特征。3. 通过实验观察减数分裂过程中染色体变化规律。4. 了解动物精子的发生过程。二、实验原理 减数分裂包括两次连续的分裂过程。一个二倍体（2n）的性母细胞（精母细胞或卵母细胞），在分裂前其染色体只复制一次，细胞连续分裂两次，分裂结果，所形成的配子细胞（精子或卵子）染色体的数目会减少到性母细胞的一半，为单倍体（n）。前期历时较长且染色体的形态和行为变化复杂，动物的精巢或睾丸，在成熟过程中会有大量处于减数分裂时期的细胞，通过适当的取材和染色处理可观察到减数分裂各期的染色体变化情况。三、实验用品】1. 材料标本：雄性蝗虫。 2. 器材：显微镜、盖玻片、载玻片、小烧杯、剪刀、镊子、吸水纸、吸管
40、、带橡皮头铅笔、解剖针。 3. 试剂 ： 甲醇、冰醋酸、70酒精、改良苯酚品红染液。四、实验方法 1.取材与固定 夏末秋初到田野或草地捕捉成熟的雄性蝗虫，（雄蝗虫腹部末端朝上，形似船尾；雌蝗虫腹末端分叉，将其投入carnoy固定液中固定24小时，然后放入95乙醇再入85乙醇中浸泡各30分钟，最后转入70乙醇中长期保存备用。2.解剖取精巢 将蝗虫从70乙醇中取出放在培养皿中，剪去背部翅膀，在其翅基部后（24节）相当于腹前部端的背中线处，仔细剪开体壁，可见上方两侧各的一条黄色的锥状长块，此即精巢，它由许多精细小管栉比排列而成，轻轻取出精巢。 3.分离精细小管 用小镊子剔除精巢上的黄色脂肪体等组织后
41、，放入培养皿中，用小镊子或解剖针将精巢中的精细小管分离开（每个精巢由多条丝状的精细小管集合而成，每根精细小管一端为游离的盲端，另一端通入输精管）。 4.制片与染色 用小镊子取12根固定好的蝗虫精细小管置于载玻片上，加一滴50醋酸软化45分钟，用吸水纸吸去醋酸，用手术刀将精细小管纵切开（或用解剖针将小管拨开）。然后滴上12滴改良苯酚品红染液静置染色510分钟，用吸水纸吸去染液，盖上盖玻片，并在其上铺12层吸水纸，用左手按住盖玻片的边缘以防挪动，用铅笔橡皮头或手指在盖玻片上扣击几下，使细胞和染色体能分散开来，这样一张减数分裂临时玻片标本便制备好了。五、标本的观察先在低倍镜下观察精巢小管的全貌，可见
42、精细管的顶端（盲端），生殖细胞处于发育的初级阶段；在精细小管与输精小管相连的一端，生殖细胞已经成熟或接近成熟；在这两端之间可见到处在不同发育时期的生殖细胞。转换高倍镜，从精细管盲端开始沿着精子成熟的顺序仔细寻找并观察不同时期的生殖细胞。 （一）精原细胞（spermatognia）：处于精细管染色最浓、细胞最为密集的部分，精原细胞的核大而圆，染色较深，细胞质染色较浅，染色体数目与体细胞相同，可通过有丝分裂增殖。 （二） 初级精母细胞（primary spermatocyte）:由一部分停止了增殖的精原细胞经过生长期而形成，体积较大。 （三）减数分裂（即第一次分裂）：每个初级精母细胞经过这次分裂形
43、成2个次级精母细胞（secondary spermatocyte），染色体数目减半。可分为前期、中期、后期和末期 四个时期，其中前期最为复杂。 1. 前期（prophase） 该时期为减数分裂过程中最富有特征的时期，历时较长，染色体的行为复杂，根据核内染色体的特征和变化特点，可将前期再细分为以下各期； 细线期（leptotene stage）:染色体细长呈丝状，相互绕成团，其上常有颗粒（染色粒），核仁清楚。 偶线期（zygotene stage）:同源染色体两两配对，这种行为称为联合（syna psis），此期染色体的形态与细线期相比没有太大变化，仍细而长。蝗虫染色体的配对从一端开始并聚集在核
44、的一侧，另一端仍散开，呈现出花束状的图像。配对后的每对同源染色体，称为二价体（bivalent）。这时的x染色体仍呈异固缩状态，形成浓染的x小体，在核膜边缘。 粗线期（pachytene stage）：同源染色体配对完成，缩短变粗，每个二价体含4条染色单体，故也称为四分体。此时染色体仍相互交织，很难分辨出染色体的条数。 双线期（diplotene stage）:染色体变得更加粗短，二价体中两条同源染体互相排斥开始分离，但不是完全分开，形成交叉图像，交叉的部位是染色单体发生交换的可见形态，随着同源染色体相互分离的加剧，交叉向端部移动（交叉端化），形成各种交叉图象，如x形、o形、v形和形等。此时，
45、x染色体也开始活动，形成“一字”形，移向细胞中央。终变期（diakinesis stage）：染色体较上期更粗更短，着色更深，故此期又称为浓缩期。因交叉点已移向染色体端部，所以呈现o、v、x、等特殊图像，此时核膜核仁逐渐消失。此期二价体的个性最清楚，计数最方便。2.中期（metaphase ） 核膜核仁完全消失，染色体高度浓缩，各个二价体向细胞中部集中，排列于赤道面上，染色体的着丝粒与纺锤丝相连（因压片关系，纺锤体不易见），侧面观可见11个二价体和x染色体排成一列；极面观各个二价体和x染色体排成一个平面。3.后期（anaphase） 细胞变长，由于纺锤丝的牵引，每个价体（四分体）分成2个二分体
46、分别向两极移动，由于着丝粒分裂，使得一极得到12个二分体，另一极则只得到11个二分体。 4.末期（telophase ） 细胞变长且中央凹陷，移到两极的染色体聚集在一起，逐步解螺旋成染色质，核膜核仁重新出现。经过该期后，一个初级精母细胞变成两个体积较小的次级精母细胞（染色体的数目减少一半）。（二）减数分裂（即第二次分裂）：是次级精母细胞分裂形成精细胞的过程，在这一时期无染色体数目的变化（但dna的量有变化），故与一般的有丝分裂很相似。每个次级精母细胞形成两个精细胞。 第二次分裂为前期、中期、后期、末期等四阶段。 1.前期（prophase ）二分体明显缩短，核膜消失，这一时期较为短暂，故不易观
47、察到。2.中期（metaphase ） 呈二分体状态的染色体排列在赤道面上，每条染色体的两条染色单体仍在着丝粒处相连。极面观二分体呈菊花状排在细胞中央。3.后期（anaphase ） 着丝粒纵裂为二，每个二分体分别形成二个单分体（即每条染色体的两条单体彼此分离形成二个独立的染色体），并分别向两极移动，移向两极的染色体数目相等。4.末期（telophase ） 染色体到达两极，开始逐渐解螺旋并聚集成团，同时细胞拉长，中央凹陷，最后，一个次级精母细胞分成两个精细胞。 （五）精细胞（spermatid）：体积比次级精母细胞小得多，核圆，镜下可见几个精细胞往往在一起。 （六）精子（spermatozo
48、on）精子由精细胞经过变态期形成。镜下可见处在变态期的精细胞，精细胞先由圆形变为圆头长尾，再逐渐变成椭圆形头和长尾，最终形成具有细长纺锤形头部和较长尾部（鞭毛）的精子。精子为单倍体（n11或n11+x）。六、注意事项1. 标本软化要充分。2. 用吸水纸充分吸干水分，否则会稀释染液。3. 压片时要把标本分散开。 七、作业与思考. 1. 绘图表示下列各期：细线期、偶线期、粗线期、双线期和终变期，中期与中期、后期、与后期。2. 减数分裂各期染色体的形态数目变化特点如何？3. 简述蝗虫精巢减数分裂标本制备的过程。实验九 细胞组分的分级分离 细胞核与线粒体的分离【实验目的】 通过细胞匀浆和离心的方法分级分离细胞的组分，了解其原理、过程及作用。 【实验用品】 1.材料和标本 小白鼠、冰块。 2.器材和仪器 玻璃匀浆器，普通离心机，台式高速离心机、普通天平、光学显微镜、载玻片、盖玻片、刻度离心管、高速离心管、滴管、10ml量筒、25ml烧杯、玻璃漏斗、解剖剪、镊子、吸水纸、纱布、蜡盘、平皿。 3.试剂 0.25mol/l蔗糖-0.003mol/l氯化钙溶液、1甲苯胺兰染液、0.02詹纳斯绿b染液。【实验原理】 细胞内不同结构的比重和大小都不同。在同一离心场内的沉降速度也不相同。根据这一原理，用不同的转速的离心法，可将细胞内各种组分分级分离出来。 分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆，
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