电子显微镜检测法检测细胞凋亡

具有凋亡特征的细胞程序性死亡后,可在扫描或透射电镜下观察到“凋亡小体”,该小体系由细胞膜卷曲、脱落形成的小泡,其内包含有完整的细胞器及核片段。这种小体易被巨噬细胞、上皮细胞等吞噬,借以清除正常发育过程中死亡的细胞。细胞坏死则无此小体形成。但是并非所有发生程序性死亡的细胞皆形成凋亡小体。

一、仪器与试剂

射电子显微镜或扫描电子显微镜,组织切片机,离心机,离心涂片机。

戊二醛固定液:取25%戊二醛原液10ml,加入0.2mol/L PBS液50ml,再加入蒸馏水40ml,混匀,4℃保存。

锇酸固定液:将含有1g锇酸的小瓶浸入清洁液过夜,用双蒸水冲洗数遍后,将小瓶放在盛有50ml双蒸水的100ml棕色磨口瓶内,击破锇酸小瓶使其内锇酸溶于水,1~5ml小瓶分装,避光,4℃保存。用时再稀释1倍成1%的应用液。

二、操作步骤

离心收集约5×106 细胞,用PBS洗涤两次后,弃上清,加1ml 2.5%戊二醛悬浮细胞,移入1.5ml Ep管中,室温下4 000r/min离心15min,固定细胞0.5~1h;

在磷酸缓冲液里漂洗1~2h或更长时间,尽量将戊二醛冼净,用1%的锇酸固定液固定30min~1h;

固定完毕后加入50%乙醇脱水10min→70%乙醇10min→90%乙醇10min→90%丙酮10min→100%丙酮三次各10min;

丙酮与环氧树脂1:1包埋2h,再放入纯包埋剂(环氧树脂包埋全浸透)数小时或过夜;

环氧树脂包埋,62℃烤箱二天,进行超薄切片,用醋酸铅铀双染法进行切片染色;

在透射电子显微镜下观察细胞形态、细胞质及细胞核的变化,照相并记录实验结果;

三、结果判断

电子显微镜是观察细胞形态最好的方法,细胞核和细胞器的结构清晰易辨。凋亡细胞染色质固缩并凝结成块,聚集在核膜周边呈新月状或环状小体,细胞浆浓缩,内质网变疏松并与胞膜融合,形成一个个空泡,线粒体结构无明显改变。细胞凋亡的晚期,细胞核裂解为碎块,产生凋亡小体。坏死细胞的染色质稀疏呈细颗粒状,分布无规律,边界不清,细胞浆肿胀,细胞器结构破坏,细胞膜不完整

THE END
0.细胞凋亡的形态学变化、原理及常用的检测方法细胞凋亡被认为是一种独特而重要的“程序性”细胞死亡模式,它是由细胞的基因决定的。细胞凋亡通常发生在发育和衰老过程中,是维持组织内细胞数量的一种稳态机制。如在免疫反应中或当细胞被疾病或有害物质破坏时,细胞凋亡也作为一种防御机制发生。jvzquC41yy}/{nfugp4dqv4uqn{ukxsfgvgjn8828;
1.细胞凋亡的检测方法临床医学检验职称3、台盼蓝染色:如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色,则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性,区别坏死细胞有一定的帮助。 4、透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩、边集,常呈新月形,核膜皱褶,胞质紧实,细胞器集中jvzquC41yy}/oni880ipo8qkpenvcwllkctzcwxjk1sjcw~klkgo{js1|j782?7482690|mvon
2.细胞凋亡,细胞凋亡通路和细胞凋亡检测的几种检测方法!资讯中心通过显微镜观察细胞的形态变化,如细胞核的浓缩、碎裂,细胞体积的减小,以及胞质的浓缩等,可以初步判断细胞是否发生凋亡。 透射电镜是形态学观察中最常用的方法之一,能够直接观察到细胞的超微结构变化。 2、DNA凝胶电泳: 细胞凋亡时,DNA会被核酸酶切割成大小不等的片段,形成DNA ladder(DNA梯状条带)。 jvzquC41yy}/kwxvtwsfp}3eqo4dp8sgyu532;:2;2;0:<:88:4tj}rn
3.一文看懂TEM透射电镜——观测物质超微结构的利器在生物科学研究方面,透射电镜可用来观察细胞整体结构、细胞亚细胞结构,包括(植物)细胞壁、细胞膜、细胞核和各种细胞器的变化、外源物质(如病原微生物、各种纳米颗粒)与细胞的关系,如外源物质进入细胞内部的方式、在细胞内的分布情况、细胞对外界刺激的反应(包括自噬、凋亡、坏死等)。 jvzquC41yy}/eujcpuoo0lto1et0cyunkegukxs1pg}t1=6:0jznn
4.实验技术(九):20种细胞死亡方式及检测方法o细胞碎片形成:细胞被切割成多个包含细胞器和细胞核碎片的小体,这些小体被称为细胞碎片或凋亡小体。 ·细胞凋亡的不同时期 o在细胞凋亡过程中,会产生许多种标志性的生理现象。随着凋亡程度的进一步加深,产生的生理现象也各有不同。 o早凋时期:细胞膜结构发生改变,细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)外翻、Bcl-2等凋亡相关蛋jvzquC41yy}/jjnpoe4ff~3ep1kdom4kphu03==313;56>3jvo
5.细胞凋亡的几种检测方法.doc(3)台盼蓝染色:如果细胞膜不完整、破裂,台盼蓝染料进入细胞,细胞变蓝,即为坏死。如果细胞膜完整,细胞不为台盼蓝染色,则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性,区别坏死细胞有一定的帮助。 (4)透射电镜观察:可见凋亡细胞表面微绒毛消失,核染色质固缩、边集,常呈新月形,核膜皱褶,胞质紧实,细胞器集jvzquC41ygtecwlocq4og}4fqe58fys5y6:e28j8nvrruv733<3:l=f{2t/j}rn
6.细胞凋亡你真的懂吗?电子显微镜检测法检测细胞凋亡 具有凋亡特征的细胞程序性死亡后,可在扫描或透射电镜下观察到“凋亡小体”,该小体系由细胞膜卷曲、脱落形成的小泡,其内包含有完整的细胞器及核片段。这种小体易被巨噬细胞、上皮细胞等吞噬,借以清除正常发育过程中死亡的细胞。细胞坏死则无此小体形成。但是并非所有发生程序性死亡的细胞jvzquC41yy}/5?5fqe4dp8ftvkimg87392=26;d688=:;?930jznn
7.透射电镜在细胞结构研究中的价值电镜细胞外基质透射电镜可以提供细胞超微结构的直观图像,包括细胞膜、细胞器、细胞核、蛋白质、核酸等组成部分;通过TEM,研究人员可以观察到细胞内各种结构的形态、大小、位置和相互作用,为细胞生物学研究提供了重要的形态学信息。 二、细胞器的研究 透射电镜是研究细胞器结构、功能和相互作用的理想工具,,通过TEM,研究人员可以详细观察jvzquC41dnuh0lxfp0tfv8|l67;128ftvkimg8igvcomu86576;8;@;