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一、免疫学诊断方法
包括皮肤试验和γ-干扰素（interferon-gamma，IFN-γ）释放试验（interferon-gamma release assays，IGRA）。皮肤试验包括传统的结核菌素皮肤试验（tuberculin skin test，TST）和重组结核杆菌融合蛋白（EC）皮肤试验。
多采用5个单位（5 IU）结核菌素纯化蛋白衍生物（purified protein derivative，PPD）皮内注射。注射后48～72 h检查注射部位反应，以皮肤硬结为准。
TST阳性判定标准
符合下列任一标准，可判定TST阳性。（1）已接种BCG且未发现免疫功能低下或抑制的儿童，硬结平均直径≥10 mm或注射局部出现双圈、水泡、坏死、淋巴管炎等强阳性反应。（2）已接种BCG但有免疫功能低下或抑制的儿童、与活动性肺结核患者有密切接触的5岁以下儿童及未接种BCG儿童，其硬结平均直径≥5 mm或注射局部出现双圈、水泡、坏死、淋巴管炎等强阳性反应。
TST结果的临床意义
（1）TST阳性：①结核潜伏感染、亚临床结核病、活动性结核病和非活动性结核病4个进程均可表现为阳性，需结合临床症状、体征及影像学特点判断是否存在活动性结核病。②不排除BCG接种交叉反应或NTM感染。
（2）TST阴性：可基本排除结核病，但应除外免疫功能低下或免疫功能抑制以及重症结核病患儿假阴性的可能。MTB感染存在窗口期，新发感染者，一般会在暴露后3～8周出现TST阳性结果。
（3）TST转阳：短期内重复进行TST会因复强效应而出现增强的阳性结果，可能会影响TST结果的判定，因此建议2次TST检测至少间隔8周。进行TST重复检测时，当前一次的TST硬结直径<5 mm时，复测结果阳性的定义为硬结直径>10 mm；如果前一次的硬结直径为5～9 mm，复测结果阳性的定义为较先前硬结直径增加10 mm或更多。
适用于≥6月龄婴儿和儿童，通常采用0.1 ml（5 U）重组融合蛋白进行皮内注射，注射后48～72 h检查注射部位反应。
EC阳性判定标准
以红晕或硬结大者为准，反应平均直径≥5 mm为阳性反应。有水泡、坏死、淋巴管炎者为强阳性反应。
EC结果的临床意义
目前临床应用数据比较有限。
（1）EC阳性：结核潜伏感染、亚临床结核病、活动性结核病和非活动性结核病4个进程均可表现为阳性，诊断儿童结核病需要结合临床表现及影像学特点综合判断。EC阳性可协助除外BCG病、BCG接种反应和大多数NTM感染。
（2）EC阴性：可基本排除结核病，但应注意免疫功能低下或免疫功能抑制以及重症结核病患者产生假阴性的可能。
基本原理
MTB感染者体内致敏的T淋巴细胞，在体外再次接受MTB特异性抗原刺激后，激活的效应T淋巴细胞能够产生特异性IFN-γ，通过对IFN-γ的检测判断是否存在MTB感染。选取的特异性早期分泌抗原靶6（early secreted antigenic target-6，ESAT-6）和培养滤液蛋白10（culture filtrate protein 10，CFP-10）抗原存在于MTB，但在BCG和大多数NTM中缺失（戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、海水分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌存在）。
根据检测技术和操作程序的不同，目前IGRA方法有2类：（1）以基于酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测全血中MTB特异性抗原刺激后释放的IFN-γ水平；（2）采用酶联免疫斑点法（ELISPOT）检测在MTB特异性抗原刺激下，外周血单个核细胞中释放IFN-γ的效应T淋巴细胞数目。
IGRA结果的临床意义
同EC结果的临床意义。IGRA临床应用比较普遍，其特异度高于TST，敏感度与TST相似。IGRA检测结果不能作为疗效监测的指标。在免疫功能低下或免疫功能抑制患者中联合使用IGRA和TST可提高检出效能。为避免IGRA的检测结果受TST影响，IGRA检测最好在行TST前或TST后1周内完成。
二、细菌学1.涂片显微镜检查常用方法
包括萋-尼氏抗酸染色和荧光染色镜检，后者的敏感度优于前者。
标本类型
包括痰、诱导痰、支气管肺泡灌洗液、胃液、胸腔积液、组织标本等。
临床应用
涂片镜检的敏感度在各研究中差别较大，在儿童肺结核中的敏感度低于15%。建议连续3 d采集标本行涂片镜检。此外，NTM及BCG涂片镜检也可阳性，故其特异度低。当（1）2份标本涂片抗酸染色镜检阳性，或（2）1份标本涂片抗酸染色镜检阳性合并胸部影像有活动性肺结核相符合病变，或（3）1份标本涂片抗酸染色镜检阳性和1份标本分枝杆菌培养阳性时，考虑结核病诊断。
2.分枝杆菌培养
分枝杆菌培养和菌种鉴定是诊断结核病的金标准。
常用方法
包括改良罗氏固体培养法和快速液体培养法，后者敏感度优于前者，因此在有条件的地区建议应用快速液体培养法。
标本类型
包括痰、诱导痰、支气管肺泡灌洗液、胃液、胸腔积液、组织标本等。
临床应用
分枝杆菌培养敏感度高于涂片镜检，不同的研究显示其在儿童肺结核中的敏感度为7.0%～46.4%。改良罗氏固体培养法需4～6周、快速液体（Bactec MGIT 960）培养法需1～3周出报告，其操作复杂，对实验室要求高，因此限制了其在临床中的应用。由于分枝杆菌属种类众多，培养阳性时需经菌种鉴定为MTBC方可诊断为结核病。培养阳性的菌株还可用于药物敏感性试验（drug susceptibility testing，DST），有助于临床选择有效的治疗方案。
三、分子生物学实验1.核酸扩增实验（nucleic acid amplification test，NAAT）基本原理
分子诊断多以MTB基因组中的管家基因、耐药相关基因作为靶标序列进行核酸扩增，如IS6110、rpoB等。目前临床上应用的NAAT主要包括实时荧光定量聚合酶链反应技术等（恒）温扩增聚合酶链反应技术及线性探针技术。
标本类型
包括痰、诱导痰、支气管肺泡灌洗液、胃液、粪便、胸腔积液、脑脊液、组织标本等。
临床应用
（1）明确是否存在MTBC。阳性提示结核病，阴性应结合临床表现及影像学特点方可排除；或（2）可评估菌株对特定抗结核药物是否耐药。存在耐药相关基因突变提示特定药物的耐药结核病，未检测到耐药相关基因突变不能排除特定药物的耐药结核病，需结合临床治疗效果进行判定。
WHO推荐的检测方法
（1）Xpert MTB/RIF检测：Xpert MTB/RIF采用rpoB基因为靶基因，其在儿童结核病诊断中具有较高的敏感度（儿童肺结核51%～73%）和特异度（97%～99%），并且能同时检测RIF耐药。因此，该技术广泛应用于肺结核和肺外结核的诊断。WHO推荐用于儿童结核病早期诊断和RIF耐药检测，可替代涂片、培养等快速诊断肺外结核病；Xpert MTB/RIF Ultra是新一代检测技术，靶基因增加了IS6110和IS1081，其敏感度优于Xpert MTB/RIF，WHO推荐对10岁以下具有典型肺结核表现的儿童，使用Xpert MTB/RIF Ultra作为结核病及RIF耐药性的初始诊断方法，取代痰涂片、培养及DST。（2）交叉引物扩增技术（cross-priming amplification，CPA）：采用IS6110基因为靶基因。在成人结核病检测的敏感度为72%。WHO于2018年在全球结核病报告中介绍了该方法，认为其可作为Xpert MTB/RIF的替代方法，在结核病的诊断中具有潜在价值。（3）分子线性探针测定法：该技术主要利用核酸扩增和反向杂交技术，将不同靶基因的特异性探针置于纸条上，进行一系列的反应。该方法可以鉴别MTBC和NTM，并进行耐药相关基因检测，敏感度（92.9%）和特异度（99.3%）高；WHO推荐GenoTypeMTBDR为MDR-TB的快速诊断方法。该方法目前缺乏在儿童中的研究数据。
2.高通量测序技术
采用高通量测序平台对临床标本或阳性培养物中的核酸进行靶向测序或全基因组测序，通过将测序数据与数据库序列比对明确是否存在MTB特异性序列，获得MTB的耐药基因突变情况，从而进行诊断和/或耐药性预测。WHO在2018年的技术指南中指出，高通量测序技术可以作为检测耐药结核病的病原学新方法，并建议在有条件的地区予以推广。其局限性为检测步骤复杂，周期较长，费用高；检测结果易受人源宿主及环境物种遗传物质的干扰。
四、结核性胸膜炎胸腔积液特点
结核性胸腔积液特点见表2。
引用本文：中华医学会结核病学分会儿童结核病专业委员会,中国研究型医院学会结核病学专业委员会,国家呼吸系统疾病临床医学研究中心,等.儿童肺结核诊断专家共识[J].中华实用儿科临床杂志,2022,37(7):490-496.